CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO industrial y de servicios No. 199

"EMILIANO ZAPATA SALAZAR"

MIXQUIAHUALA HGO. 

TIEMPO DE SANGRADO. 

OBJETIVO:
Que al termino de la practica realice el tiempo de sangrado por cualquiera de los dos métodos existentes. 

INTRODUCCIÓN:
Un tiempo de sangrado normal indica una retracción normal de los capilares, y la existencia de un numero suficiente de plaquetas, con actividad normal.
La metamorfosis viscosa normal depende de un buen mecánico extrinseco de producción de Tromboplastina, por tanto, el tiempo de sangrado se alarga en la insuficiencia del factor VII. El tiempo de sangrado aumenta en forma característica en la púrpura trombocitopenica. 

METODOLOGÍA:
Se utilizará el "Método de Duke"

MATERIAL:
-Lanceta estéril.
-Torundas alcoholadas.
-Reloj cronometro.
-Papel filtro.

TÉCNICA:
1- Con una lanceta estéril, se practica en el borde inferior del lóbulo de la oreja una punción de 3 mm. de profundidad. Se pone en marcha el cronometro.
2- A intervalos de medio minuto, se aplica cuidadosamente sobre la gota de sangre el borde de un pequeño disco de papel filtro, cuidando de no tocar la piel. Esta maniobra por objeto es impedir que se forma un coagulo en la gota de sangre sobre la herida, pes los tiempo de sangrado resultarán anormalmente bajos.
3- Utilizando una nueva zona de papel filtro para cada secado de medio minuto, puede tenerse un registro conveniente del tiempo total (tiempo en minutos=numero de gotas divididas entre dos), Se toma como punto final al momento en el cal el papel filtro ya no absorbe sangre.

TIEMPO DE SANGRADO NORMAL CON EL MÉTODO DE DUKE:
De uno a tres minutos (sin embargo puede ser a veces hasta cinco minutos en sujetos normales).

MÉTODO DE IVY.

TÉCNICA:
1- Se coloca alrededor del brazo un manguito de esfindonometro con el cual se ejerce una presión de 40 mm. de Hg. que debe permanecer aquel durante toda la prueba.
2-Utilizando una lanceta estéril se hace a intervalos cortos tres punciones (entre 2.5 y 3.0 mm de profundidad), a lo largo de la cara flexora (interna) del antebrazo, evitando las venas visible. Se pone en marcha el cronometro. 
3- A intervalos de medio minuto, utilizando papel filtro se seca cuidadosamente cada gota de sangre en la misma forma que para el método de DUKE, el punto final es el mismo.


RESULTADO:  PACIENTE 1 - 2.50 min
                           PACIENTE 2 - 3.15 min

TIEMPO NORMAL DE SANGRADO EN EL MÉTODO DE IVY.

Entre 2 y 6 minutos (máximo de 7 minutos)

NOTA: El tiempo de sangrado representa sencilla y útil (aunque algo imprecisa) de la eficacia de las funciones capilares y de plaquetas en la hemostasia. Es preferible el método de IVY al de DUKE, pues las condiciones son mas constantes y se realizan en realidad tres pruebas. 

EVIDENCIAS:

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"EMILIANO ZAPATA SALAZAR"

MIXQUIAHUALA HGO.

ROSA DE BENGALA.

(Antígeno Brucelar Amortiguado)

para el Diagnostico de Brucelosis.

Prueba de aglutinación rápida en placa para la detección temprana de aglutininas especificas de Brucella (Brucella melitensis, abortus y suis)

PRINCIPIO:

Se utiliza un antígeno de Brucella abortus biotipo 1 (cepa 99S o cepa 1119-3) acidificado regulado y teñido con Rosa de Bengala a un pH de 3.65+/- 0.05 para la detección de aglutininas especificas de Brucella. Esta prueba puede ser utilizada para un diagnostico temprano.

REACTIVOS:

Antígeno Rosa de Bengala

Control positivo de Brucella

Control negativo de Brucella

PRECAUCIONES:

Únicamente para uso de diagnostico In-vitro.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD DE LOS REACTIVOS:

El reactivo y los controles son estables de 275-281 K (2-8 °C) hasta sus respectivas fechas de caducidad.

MATERIAL PROPORCIONADO:

-Placa de prueba. (Se recomienda que siempre se utilice una placa de vidrio para una mejor observación de los resultados)

-Pipetas desechables.

-El gotero incluido proporciona una gota de 30-40 ul

-Se sugiere utilizar pipetas automáticas preferentemente. 

MATERIAL REQUERIDO (NO PROVISTO)

-Cronometro

RECOLECCIÓN DE MUESTRA Y PREPARACIÓN:

Se recomienda que únicamente se utilice suero.

Evite la hemolisis o lipemia de las muestras ya que esto puede interferir con los resultados. Conservar la muestra de 275-288 K (2-8 °C) si no se va a realizar el estudio en el momento. 

PROCEDIMIENTO:

1- Llevar a temperatura ambiente el reactivo,controles y muestras de suero.

2- Utilizando la pipeta automática adicione 30 ul de la muestra del paciente en un circulo de la placa.

3- Mezcle suavemente el Antígeno Rosa de Bengala hasta que se encuentre totalmente homogéneo, después coloque 30 ul en la placa de la prueba en el mismo circulo donde se coloco la muestra del paciente, mezcle ambas con un aplicador. (usar un aplicador diferente para cada muestra. Repita este paso para cada muestra de paciente y controles.

4- Agitar la placa con movimientos rotatorios por 4 minutos.

5- Con la ayuda de una fuente de luz directa lea el resultado. Importante: Después de este tiempo la lectura ya no es valida.

RESULTADOS:

La lectura debe llevarse a cabo exactamente a los 4 minutos tomados a partir de que se comenzó a mezclar. Este en  un tiempo limite optimo en el que se da un espacio para la observación de ciertas aglutininas que se revelan lentamente y que de otra manera se pueden omitir, ademas de que se pueden omitir, ademas de que se pueden presentar reacciones no especificas. 

*No Aglutinación - Suero Negativo.

*Cualquier cantidad de Aglutinación - Presencia de anticuerpos específicos. Suero Positivo.

Esta es solo una prueba cualitativa de screening, la cal si resulta positiva debe ser confirmada mediante otra prueba cuantitativa para brucelosis como: Aglutinación Lenta Estándar o Aglutinación Lenta en Presencia de 2-Mercaptoetanol

RESULTADO:    MUESTRA 1 - NEGATIVO

SENSIBILIDAD: 25 Ul/mL.

Evidencias 

 

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"EMILIANO ZAPATA SALAZAR"

MIXQUIAHUALA HGO.

ANALIZA Y FRACCIONA SANGRE CON FINES TRANSFUSIONALES.

VDRL.

Antígeno de cardiolipina para investigar reaginas de la sífilis en Suero sin inactivar, en Plasma y      L.C.R. (no requiere reconstitución)

Agente de Diagnóstico

INTRODUCCIÓN:

Treponema pallidum, la bacteria que causa la sífilis, una enfermedad que generalmente se transmite por vía sexual.

Su diagnóstico puede ser serológico, con lo que se pueden determinar dos clases de anticuerpos:

1.    Tipo “cardiolipina”.- No treponema e inespecíficos.

2.    Antitreponemas específicos.

La prueba realizada Venereal Disease Research Laboratory VDRL se le conoce como una prueba para sífilis no-treponémica. Es parte de la exploración inicial de la sífilis e iniciar un tratamiento. Con  el método cualitativo empleando la  placa presenta floculación, si se presenta el caso se lleva a cabo el método cuantitativo con el o los sueros positivos.

También se emplea en el cuidado prenatal del embarazo, así como parte de los estudios de laboratorio prenatales.

MATERIAL:

•     Placa cóncava
•      Puntillas
•     Aguja No. 21 sin bisel
•     Cronómetro

EQUIPO:

•   ¨Pipeta semiautomática
• Microscopio
• Muestra
•    Suero (Obtener 3 ml. de sangre por punción venosa, centrifugar y separar el suero)
• Reactivo Antígeno VDRL y los Sueros de Controles (almacenados 2-8°C)

      PROCEDIMIENTO:

    

  MÉTODO CUALITATIVO.

1. Depositar 0.05 ml. de suero problema en un anillo de la placa cóncava.

2. En otro anillo colocar una gota de suero control positivo y en el anillo siguiente una gota 

de suero control negativo, extendiendo dentro de los mismos.

3. Añadir una gota del antígeno en suspensión previamente resuspendido en cada muestra 

con la aguja N.21

4. Colocar la placa sobre un agitador mecánico a 180 rpm durante 4 min.

 (Nota: lo realizamos de forma manual a falta de agitador). 

Las pruebas que se realizan en un clima extremadamente seco pueden evaporarse, por lo tanto

la paca se cubre con la tapa de una caja Petri humedecida.

RESULTADOS:
      Paciente 1 : POSITIVO (Presencia de floculacion)

MÉTODO CUANTITATIVO.  
    

    1. Seleccionar los sueros positivos obtenidos en la prueba cualitativa.
    2. Colocar en una gradilla 6 tubos y numerarlos.
    3. Agregar a cada uno 0.5 ml. de solución salina al 9%.
    4. Depositar 0.5 ml. de suero al tubo 1 y mezclar.   
    5. Pasar 0.5 ml. del tubo 1 al tubo 2 mezclar.
    6. Pasar 0.5 ml. del tubo 2 al tubo 3 mezclar
    7. Continuar con este proceso hasta el tubo 6. 
    8. Depositar 0.05 ml. de cada una de las diluciones sobre los diferentes anillos de la placa 
cóncava.
    9. Añadir una gota del antígeno en suspensión estabilizado (VDRL) utilizando la aguja No.21 sin 
bisel a cada dilución.
    10. Colocar la placa sobre un agitador mecánico a 180 rpm. Durante 4 min.
    11. Leer al microscopio con objetivo seco débil 10x.
    Resultados e interpretación
    El título del suero problema será la última dilución que presente un resultado positivo. Ejemplo:
    Si se presenta floculación hasta el tubo 3 – dilución 1:8, por lo tanto el título será 1:8.
     Nota: 
    1.Sueros extremadamente turbios o hemolizados son insatisfactorios para la prueba.
    2. Sueros débiles positivos y fuertes evidencias clínicas de la enfermedad es conveniente 
efectuar la prueba cuantitativa, ya que ocasionalmente pueden presentar el fenómeno de 
prozona.
    3. Si la lectura del resultado no se realiza inmediatamente después de los 4 min. puede secarse 
la reacción y dificultad en la interpretación.
    4. El antígeno en suspensión debe estar a temperatura ambiente antes de ser utilizado.