CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO industrial y de servicios No. 199

    "DETERMINACIÓN DE LA HEMOGLOBINA"

OBJETIVO. Determinar cuantos gr. de hemoglobina (Hb) hay en toda la sangre circulante, para tener un diagnostico clínico ya que se pueden varias diversas enfermedades debido a un valor anormal de Hb.

Fundamento:

La hemoglobina es una proteína conjugada que sirve para el transporte de oxigeno y dióxido de carbono. La masa total de eritrocitos de un adulto contiene unos 600gr. De hemoglobina capaces de transportar 800 ml de oxígeno.

Una molécula de hemoglobina consta de 2 pares de cadenas polipepticas (unión de aminoácidos) (globina) y 4 grupos proteicos HEM que contienen cada uno un átomo de fe en estado ferroso. Cada punto HEM se localiza en una zona determinada de una de las cadenas de polipepticos. Localizando cerca la superficie de la molécula, el HEM se combina de forma reversible con una molécula de oxigeno y dióxido de carbono. Este grupo HEM es el responsable del del color rojo de la hemoglobina (hb).

La parte proteica o globina tiene 4 cadenas polipeptidicas que se denominan con las letras α, β, γ, δ. Existe una cadena mas la ε que esta presente durante los 3 primeros meses de vida se diferencian unas de las otras en el numero o posición (de los aminoácidos de los que están compuestas). Por lo tanto existen varios tipos de hb. en el ser humano se pueden encontrar las siguientes hemoglobinas normales:

Hemoglobina A: consta de 2 cadenas α y 2 cadenas β en un adulto normal corresponde a mas del 95% del total.

Hemoglobina A´: consta de 2 cadenas α y 2 cadenas δ en un adulto sano esta en porción menor de 3%.

Hemoglobina F (fetal): consta de 2 cadenas α y 2 cadenas γ. Es la hemoglobina principal en el feto desde el 4° mes del embarazo hasta aproximadamente los 6 meses de edad. La Hb F tiene mayor afinidad por el oxigeno.

Hemoglobina Gower: consta de 2 cadenas α y 2 cadenas ε. Desaparece casi por completo en el tercer mes de embarazo y empieza a aparecer la Hb fetal.

Reactivos:  Reactivo Drabkin  Ferrocianuro de potasio  Cianuro de potasio  Bicarbonato de potasio  Solución estándar de cianometahemoglobina  Reactivos biológicos:  Sangre venosa con EDTA.

Material y Equipo:

espectrofotómetro.

 Una pipeta de vidrio graduada de 5 mL

 Pipeta semiautomática

 Tubos de ensayo.

 Gradilla

 gasa

Procedmiento

1.-En un tubo de 13 x 100 colocar exactamente 5 mL de reactivo de Drabkin, marcarlo como problema (P).

2.-Obtener 5 ml de sangre venosa con anticoagulante (EDTA).

3.- Mezclar perfectamente la sangre problema, por inversión por lo menos 20 veces antes de tomar la muestra.

4.-Con una pipeta automática o pipeta de Shali se toma exactamente 0,02 mL (20 µL) de sangre total, limpiar luego la punta de la pipeta con papel.

5.-La sangre tomada del tubo con EDTA se vierte en el tubo que contenga reactivo de Drabkin. Se enjuaga 3 veces y se mezcla.

6.- Mezcle la solución de Drabkin con la sangre por inversión y con mucha precaución

7.-Dejar en reposo por espacio de 3 a 5 minutos. Para que se  efectúe la reacción.

MEDICIÓN EN EL ESPECTROFOTOMETRO

1.- encender el espectrofotometro y proseguir con la lectura.....

RESULTADOS:

Formula:  muestra/estándar X 15 = Hb

Muestra 1:

Absorbancia: .294

Estándar: .340

.294/.340 X 15 = 12.9705 g/dL         NORMAL

Muestra 2:

Absorbancia: .337

Estándar: .340

.337/.340 X 15 = 14.8675 g/dL         NORMAL

 conclusión:

Esta prectica nos es util para Poder determinar el volumen de Hb que hay en la sangre y asi como tambien ayuda a identificar o descartas enfermedades.